ＲＡ的特异性抗体 - 风湿病专院

兰州蜀草中医院-----谢运发

抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体

　　了解抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的意义,并比较抗MCV抗体与类风湿因子(RF)、抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体以及某些临床指标的相关性.方法对166例研究对象,包括74例RA患者(其中早期18例,中晚期56例),50例非RA的风湿性疾病患者,42名健康对照,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的抗MCV抗体,同时检测其他相关自身抗体,结合临床资料进行分析.结果 74例RA中抗MCV抗体阳性58例,对RA诊断的敏感性为78%,特异性为95%,阳性预测值和阴性预测值分别为97%和71%.抗MCV抗体阳性的平均抗体浓度依次为(552±；；380)U/ml(RA组),(162±；；63)U/ml(非RA组),(63±；；46)U/ml(健康对照组).RA组的平均抗体水平较高.抗MCV抗体和抗CCP抗体相关性最强(r=0.502,P=0.000),APF、AKA次之(r=0.369、0.408,P＜0.01).抗MCV抗体与各项临床、实验室指标间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论抗MCV抗体在RA中具有较高的敏感性和特异性,且较APE、AKA与抗CCP抗体相关性强,可作为RA诊断的辅助指标.抗MCV抗体可能与病情活动度、功能状态无关.

　　RA33/36抗原的纯化及相应抗体的检测

　　RA33、APF、AKA、抗Sa抗体

　　四种类风湿关节炎（RA）早期诊断的特异性抗体

　　异质性胞核核糖核蛋白（RA33／36）RA33/36可以出现在疾病的起病阶段，所以有早期诊断价值。

　　RA33/36抗原的制备及其抗体的检测：用Ehrlich腹水癌细胞提取的抗原检测抗RA 33/36抗体。简述如下，A型玻璃匀浆器破坏细胞膜，保存细胞核，750 g离心5 分钟，取沉淀，弃上清。加入4 ml核悬浮(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓冲液含有2.5 mmol/L MgCl 25%甘油)，搅拌30分钟，加入4 ml破核液(10 mmol/L pH 7.9 HEPES-KOH缓冲液含有0.88 mmol/L NH₄Cl)搅拌30分钟，50 000 g离心20分钟，取上清，弃沉淀。上清液透析24～48小时，分装－80 ℃冰箱保存。选用5%浓缩胶，12%分离胶电泳，样品入浓缩胶前5 mA，进入浓缩胶后提高电流至10 mA，样品进入分离胶后改电流15 mA。电泳结束后，将抗原转印在硝酸纤维膜上。先后加血清、辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体和底物液显色。凡在蛋白质分子量为33 000和/或36 000区带出现条带者为阳性。

　　纯化RA33/36抗原，观察其检测效率。方法；；；从小鼠Erlich腹水癌细胞中提取RA33/36粗抗原，使用肝素-琼脂糖凝胶CL-6B对RA33/36粗抗原进行亲和层析，SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）和免疫印迹法（IBT）检测富含RA33/36的组分，比较粗抗原和纯化抗原的检测效果。结果 SDS-PAGE和IBT显示RA33/36抗原主要存在于缓冲液C的洗脱峰中，纯化抗原较粗抗原杂蛋白条带明显减少，且更加清晰，在检测RA33/36抗体时得到了相同的阳性和阴性结果。结论纯化的RA33/36抗原较粗抗原提高了抗体检测效率，可广泛应用于临床。

　　八、抗P68抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义；；；
　　以Hela细胞为底物，建立了间接免疫荧光法检测抗P68抗体的方法。并检测183例RA病人，及114例其他结缔组织病和81例正常人血清中的抗P68抗体，分析了该抗体与RA的临床及实验室指标的相关性。结果发现183例RA患者中，抗P68抗体的阳性率为67.76%(124/183)，114例非RA风湿病患者中阳性率为14.9%(17/114)，81例健康人中无一例阳性(0/81)。抗P68抗体对RA的敏感性和特异性分别为67.76% 和91.28%。阳性预测值为87.94%，阴性预测值为75.11%。并且该抗体可以在RA早期和RF、CCP等抗体阴性的RA患者血清中出现。抗P68抗体阳性的RA 患者与抗P68抗体阴性的患者在病程、RF、双手X线分期等因素有显著差异（p<；；0.05）。抗P68抗体阳性的RA 患者病程长、RF滴度高且骨质破坏明显。综上所述，抗P68抗体是一种对RA诊断较为特异的新型自身抗体

　　补体C3、C4、CH50、循环免疫复合物(CIC)、免疫球蛋白

　　补体C3、C4、CH50

补体C3

　　【参考值】1.12 ±；；0.55mg/L(1.01-1.86)

　　【临床意义】C3是补体系统中含量最多、最重要的一个组分，它是补体两条主要激活途径的中心环节，有着重要的生物学功能，因此对C3的研究日趋重视。

降低：主要见于免疫复合物引起的肾炎、系统性红斑狼疮、反复性感染、皮疹、肝炎、肝硬化、关节疼痛等。

　　增高：见于各种传染病及组织损伤和急性炎症，肝癌等。

　　补体C4

　　【参考值】0.553±；0.109mg/L(0.16-0.47)

　　【临床意义】C4是补体经典激活途径的一个重要组分，它的测定有助于SLE等自身免疫性疾病诊断，治疗和病因探讨。

　　降低：见于免疫复合物引起的肾炎、系统性红斑狼疮、病毒性感染、狼疮性症侯群、肝硬化、肝炎等。

　　增高：见于各种传染病、急性炎症、组织损伤、多发性骨髓瘤等。

C4含量升高常见于风湿热的急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗塞、Reiter综合征和各种类型的多关节炎等；降低则常见于自身免疫性慢性活动性肝炎、SLE、多发性硬化症、类风湿性关节炎、IgA肾病、亚急性硬化性全脑炎等。在SLE，C4的降低常早于其他补体成分，且缓解时较其他成分回升迟。狼疮性肾炎较非狼疮性肾炎C4值显著低下。

血清总补体溶血活性（CH50）测定

　　【参考值】50～100kU/L(CH50)

　　【临床意义】补体是存在于正常人新鲜血清中的一组不耐热、具有酶活性的、比较复杂的血清蛋白。补体是一个多种血清蛋白组成的复杂系统。它除了具有溶血作用和一定的杀菌作用外，还可以促进炎症反应，参与一些变态反应和自身免疫性疾病的病理过程。补体并不随机体的免疫反应增加而升高，只有在疾病情况下才出现波动。

　　要机体发生炎症时，补体值可以增高，但在多种自身免疫性疾患和变态反应性疾患，补体值往往下降。因此，临床上动态观察补体值的变化，以这一类疾病的诊断、病因研究及预后判断有重要意义。

　　血清补体值增高：可见于许多炎症疾患以及阻塞性黄疸、糖尿病、急性风湿热、皮肌炎、甲状腺炎、结节性结肠炎、菌血症、急性心肌梗塞、各种传染病、肺炎、肿瘤等。

补体减低：见于免疫复合物引起的肾炎、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、病毒性肝炎、肝硬化、休克、异体移植排斥反应、痢疾的反复发作、桥本氏甲状腺炎等。

　　循环免疫复合物（CIC）

　　非特异性循环免疫复合物：免疫复合物即是抗原-抗体复合物。机体内免疫复合物的形成，即是机体防御机制的一部分，也是免疫复合物形成的基础。

循环免疫复合物（CIC），主要是指血液中免疫复合物，对循环免疫复合的检测、近年来受到广大临床医师和实验室工作者的重视。检测循环中免疫复合物的存在及其含量变化，对免疫复合物的诊断，病程的动态观察，以及对预后的判断都有其重要意义。

根据形成免疫复合物的抗原-抗体的已知或未知的将CIC分为两大类，前者为特异性免疫复合物（如乙型肝炎的HBsAg-抗-HBs，甲状腺蛋白抗原-甲状腺球蛋白抗体形成的免疫复合物）；后者为非特异性免疫复合物（如肾小球肾炎、系统性红斑狼疮等）。非特异性免疫复合物的检测应用较广泛，方法也较多。

　　【参考值】

　　聚乙二醇沉淀试验：阴性

　　聚乙二醇-酚显色法：4.60±；；8.20mg/L

　　固相CIq酶联免疫吸附试验：1～36mg/L

　　PEG沉淀紫外分光比色法：吸光度0.12

　　单株类风湿因子沉淀试验：阴性（正常血清与mRF不形成沉淀线）

【临床意义】

免疫复合物增高的疾病有：血清病、药物热、肾小球肾炎、脉管炎、系统性红斑狼疮、干燥综合症、慢性活动性肝炎、硬皮病、皮肌炎、类风湿性关节炎等。

免疫球蛋白

　　免疫球蛋白G

　　【参考值】IgG 8.44-19.12g/L

　　【临床意义】

　　1.年龄与血中Ig含量有一定关系。

　　2.免疫球蛋白异常

　　(1)低Ig血症：有先天性和获得性二类。先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺损和联合免疫缺陷病。一种情况是Ig全缺，如 Bruton 型无Ig血症，血中IgG＜1g/L，IgA与IgM 含量也明显降低。另一种情况是三种Ig 中缺一或二种。最多见的是缺乏IgA，患者易患呼吸道反复感染；缺乏IgG 易患化脓性感染；缺乏IgM 易患革兰阴性细菌败血症。获得性低Ig血症，血清中IgG＜5g/L，引起的原因较多，如有大量蛋白丢失的疾病（剥脱性皮炎、肠淋巴管扩张症、肾病综合征）；淋巴网状系统肿瘤（淋巴肉瘤、何杰金病）；中毒性骨髓疾病等。

　　(2) 高Ig血症感染：各种感染，特别是慢性细菌感染可使Ig升高。如慢性骨髓炎、慢性肺脓肿，血IgG 可升高。子宫内感染时脐血或生后两日的新生儿清中IgM含量可＞0.2g/L或＞0.3g/L。自身免疫病、肝脏疾病（慢性活动性肝炎、原发性胆汗肝硬变、隐匿性肝硬变）患者可有 3种Ig升高。慢性活动性肝炎IgG和IgM升高明显。各种结缔组织病中常见Ig升高。SLE以 IgG 、IgA 或IgG 、IgM升高较多见；类风湿性关节炎以IgM增高为主。

　　M蛋白血症：主要见于浆细胞恶性病变，包括多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。

免疫球蛋白A

　　【参考值】0.6～3.4g/L (浊度计法)。

　　【分析变异】浊度计法分析变异系数CV=8%。

　　【生物学变异】

　　1．升高社会经济学因素（黑色人种）约可升高20%～75%，60～80岁老人约升高15%～60%，雨季较旱季约高20%。锻炼约升高14%，冬季较夏季约高10%～14%。肥胖女性约升高30%，男性约升高4%～30%。

　　2．降低新生儿显著减低达98%～100%，3～5岁儿童约低50%，口服避孕药约降低11%～40%，妊娠约升高20%

　　【药物影响】

　　L-门冬酰受酶通过增加肝脏合成IgA的作用约升高30%～60%，嗜酒者如继续饮酒可导致IgA 升高。

　　甲基强的松龙致43%病例的IgA明显降低。甲苯、二甲苯和苯的职业接触者其IgA明显降低，嗜酒者戒酒一年以后可降低。右旋糖苷导致IgA降低。

　　免疫球蛋白M

　　【参考值】IgM 0.5-1.96 g/L

　　【病理学变异】

　　1．升高见于多发性骨髓瘤-重链病、良性低蛋白血症、酒精性肝硬化、活动性慢性肝炎、多发性硬化、风湿病、感染性疾病和接种。

　　2、降低见于小肠病、肾脏病、癌、夸希奥科营养不良、医源性低丙种球蛋白血症、原发性低丙种球蛋白血症和无-球蛋白血症。

免疫球蛋白E

　　【参考值】 IgE xx g/L

　　变态反应性疾病、寄生虫感染、急性或慢性肝炎、IgＥ骨髓瘤、SLE、类风湿性关节炎患者血清IgＥ含量升高。

　　免疫球蛋白D

　　【参考值】IgD xx g/L

　　IgＤ的生物学功能未完全阐明。妊娠末期、大量吸烟者、IgＤ型骨髓瘤患者血清中IgＤ含量升高。